液相色譜分析中緩沖鹽的正確使用方法

在液相色譜分析過程中常常需要使用緩沖鹽來調節流動相的pH 值，緩沖鹽的不當使用對液相色譜柱可能造成柱壓升高、柱效下降以及使化合物的保留時間發生變化等影響。

緩沖鹽是指對pH有緩沖能力的鹽，能夠讓pH維持在一個恒定的數值。色譜分析技術分享緩沖鹽的正確使用方法：

1、使用前的處理: 在使用緩沖鹽作流動相之前需要用不含緩沖鹽的流動相沖洗色譜柱，直至基線平穩。原則上，用于沖洗的流動相與分析時所用的流動相含水的比例相同(或含水更多)，不同的只是用于沖洗用的流動相中不含緩沖鹽。

理由：緩沖鹽通常易溶于水，難溶于有機溶劑。用含緩沖鹽的(特別是做流動相的水為飽和的緩沖鹽溶液時)流動相進行分析時，如果分析前色譜柱中用于保存色譜柱的流動相中含水的比例相對較小，不先沖洗掉，接下來做樣品的時候所用的流動相中如果有機溶劑含量大，而其比例中所含的水又不足以溶解該緩沖鹽時，緩沖鹽將會在色譜柱柱體上析出，沉積下來，這將可能導致上述對色譜柱的損害。

2、使用后的處理：用與分析時含水比例相同的流動相(與分析用流動相的區別是，用于沖洗的流動相不含緩沖鹽)進行沖洗約30min，直至基線平穩。如果該色譜柱在接下來很長的一段時間內不使用，要長期保存，則需再加上一步，即用純的有機溶劑沖洗一遍，直至基線平穩. 緩沖液可以提供離子平衡的反離子，并使流動相保持一定的離子強度和ph值，減少拖尾。

使用緩沖鹽須注意以下幾點

1、避免使用鹽酸鹽，鹽酸鹽對鋼質有腐蝕作用。

2、緩沖液最好要現配現用，往往緩沖液是良好的菌類培養液，隔天或放置長時間實驗時會有很多怪現象發生。

3、實驗后不可用有機溶劑直接過度，有機溶劑會處使鹽類析出，造成液路或色譜柱堵塞，可用95：5的水甲醇沖洗。

4、使用緩沖液要及時掌握ph范圍，做到胸中有數。

5、清洗液路和柱子時，有溫控可加熱到30攝氏度易于沖洗。

6、長時間用緩沖溶液要注意觀察接頭處有無析出，若有白色鹽類析出，可考慮一定周期用10%硝酸沖洗一下液路(拆下柱子，走30ml,再用5倍水沖洗)可以避免液路的堵塞。

7、選擇緩沖液要用可靠的試劑，避免不純的鹽類造成不必要的麻煩。